进行RNAi实验时，您是不是会碰到以下问题：

1、  目的细胞暂时不易得到，比如说原代培养的细胞，稀有难得的细胞株或者目的细胞暂时还没有到位；

2、  目的细胞转染效率低（转染效率在60%以下一般都认为转染效率偏低）；

3、  目的细胞需要诱导才能表达靶基因；

4、  目前尚无靶基因的抗体。

       当这些问题摆在我们面前，而实验又必须继续进行的时候……

赢润生物为您提供切实可靠的解决方案——RNAi外源筛靶

技术路线：

1、制备至少叁个靶点RNAi质粒；

2、构建靶基因重组真核表达质粒：靶基因与报告基因融合。因为siRNA是在核酸水平起效，所以，一般我们只克隆靶基因CDS区片段。

3、将各RNAi质粒分别与靶基因真核表达质粒瞬时共转染入工具细胞。

（1）通过荧光显微镜检测实验组相对于阴性对照组（阴性对照siRNA＋靶基因真核表达质粒）报告基因的表达水平下降程度；

（2）用报告基因抗体进行WesternBlot检测，来间接反映靶基因siRNA的抑制效率。

参考文献：

1. Takeshi Kawauchi, Kaori Chihama, Yo-ichi Nabeshima and Mikio Hoshino. Cdk5 phosphorylates and stabilizes p27kip1 contributing to actin organization and cortical neuronal migration. Nature Cell Biology,  volume 8, number 1, January 2006:17-31.

2. Irena Crnkovic-Mertens, Julia Semzow, Felix Hoppe-Seyler, Karin Butz. Isoform-specific silencing of the Livin gene by RNA interference defines Livinβas key mediator of apoptosis inhibition in HeLa cells. J Mol Med (2006) 84: 232–240.

    基于公司强大的基因库和shRNA库，以及RNAi实验中遇到的问题，隆重推出外源筛靶套餐服务。服务流程如下所示：

对于基因克隆构建、RNAi技术路线以及外源筛靶综合套餐有任何疑问或者需要更多基因功能相关资料敬请来电咨询