

--2011年最“给力”的Western Blot方法。
本实验为体外纯化蛋白,利用生物素-链亲和相互作用将寡核苷酸连接到生物素标记的纯化蛋白上。经孵育后作为分析探针的寡核苷酸经与上述结合在蛋白质上的寡核苷酸杂交,对齐之后使用DNA连接酶将它们连接成双链DNA。随后通过常用的TaqMan®探针qPCR检测来推测蛋白-蛋白相互作用的强弱。
此法与GST/His Pull-Down相比的优点是:
1. 不需要使用抗体做Western Blot检测,节约时间、经费
2. 没有GST/His等融合Tag的影响,保证蛋白在正常的三级(四级)结构状态下相互结合
3. 可以使用不同来源纯化后的蛋白来作检测
4. 灵敏度高、数据稳定,能精确量化蛋白-蛋白相互作用的强弱。

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