RNA 纯化技术是现代分子生物学技术的基础,cDNA文库构建、蛋白质体外翻译、RNA序列分析及Northern Blot等都需要一定纯度和一定的完整性的RNA。完整和均一是评价RNA质量的两个关键标准。要获得完整的RNA取决于能否最低限度地避免纯化过程中内源及外源性RNase对RNA降级:要获得均一的RNA取决于能否有效去除RNA提取中DNA和蛋白质。
服务内容:
从动植物组织、细胞、细菌、酵母等不同生物材料中提取总RNA。服务流程:
1. 样品预处理客户需提供新鲜的样品或取样后立即在低温(-20℃或-70℃)冷冻保存的样品,避免反复冻溶,反复冻溶会导致RNA的降解和提取量下降。
植物组织——液氮研磨
动物组织——匀浆、液氮研磨
培养细胞——蛋白酶K消化
细菌——溶菌酶消化
酵母——液氮研磨、玻璃珠破碎
2. 细胞裂解(异硫氰酸胍/苯酚法)
这是传统的提取RNA的方法,适用于大部分动植物材料。异硫氰酸胍能使核蛋白复合体解离,并将RNA释放到溶液中,采用酸性酚-氯仿混合液抽提,低PH值的酚将使RNA进入水相,而蛋白质和DNA仍留在有机相,从而完成RNA的提取工作。
3. RNA的纯化(有机溶解抽提法)
用氯仿抽提裂解液,去除蔗糖、蛋白等杂质,并促进水相与有机相的分离。高速离心后收集水相,用0.6倍体积的异丙醇或与水相等体积的异丙醇沉淀RNA。室温沉淀20-30分钟,低温高速离心,获得RNA沉淀。用无RNase的75%乙醇洗涤RNA沉淀,干燥后用适量RNase-free ddH2O 溶解RNA沉淀。
4. RNA的检测
RNA完整性检测
用甲醛变性凝胶电泳检测RNA的完整性。
RNA得率检测
用分光光度计测定RNA溶液在260nm处的吸光值。用标准品测得在波长在260nm,1ug/mlRNA钠盐吸光度为0.025(光程为1cm),即OD260=1时,样品中RNA浓度为40ug/ml。
总RNA浓度(ug/ml)=OD260×稀释倍数×40ug/ml
5. RNA纯度检测
通过OD260/OD280检测RNA纯度。
OD260/OD280值在1.9-2.1之间,RNA的纯度较好
OD260/OD280值小于1.8,表明蛋白杂事较多
OD260/OD280值大于2.2,表明RNA已经降解
服务价格:
| 样本量 | 价格 | 周期 |
|---|---|---|
| <30样品 | ¥100/样品 | 1-2周 |
| ≥30样品 | ¥80/样品 | 根据样品量 |