TRC(RNAi协会)专业出品,针对人及小鼠近万个基因,总数达五万多条(每个基因3~5条shRNA)的shRNA库。经过大规模实验验证,其中超过90%均为有效shRNA,其干扰效率均大于80%(大多数超过90%)。
装载shRNA序列的真核表达载体,同时也是本公司第三代慢病毒包装系统中的穿梭载体。也就是说,如果您的目的细胞质粒转染效率较低,那么您只需再购买相应的慢病毒包装系统中的包装质粒、转染试剂、293T包装细胞,您便可以将这些shRNA包装慢病毒,利用慢病毒的高感染效率、高表达效率、长期表达特性,更好地进行RNA干扰研究实验!
服务流程:
- 1. siRNA表达载体的选用:
- 2. 设计siRNA靶序列
- 3. 合成模板:
- 4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后,1 %琼脂糖凝胶电泳,回收线性载体。
- 5. 连接与转化: 把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶,插入片断与载体的摩尔比约为 3 : 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌,在LB Amp培养基上涂板,37 ℃培养过夜。
- 6. PCR 鉴定、测序鉴定
- 7.离心柱抽提阳性克隆载体并定量。
本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记,可以建立稳定表达系,同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因,可以无限扩增。
A 、根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列,靶序列一般为19 - 21nt 长。
B 、对于每条选定的siRNA 靶序列,设计 siRNA 正义链和反义链,以 loop(9nt) 相连,称为 shRNA(short hairpin RNA)。
C、阴性对照的设立.
合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链,退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚 合酶转录中止位点,同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点,可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点 的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。
服务价格及周期:
针对每个目的基因(人、小鼠种属),我们均提供一套shRNA克隆(包括3~5条shRNA),价格5000元。
到货周期为3~4周。
服务承诺:
针对shRNA库产品,我们承诺针对每个基因提供的一套shRNA克隆中,每两条shRNA中至少有一条shRNA是有效的,其干扰效率大于80%。在细胞转染效率大于80%,且客户检测shRNA有效性的实验方法恰当、操作正确的前提下,如果没有达到上述标准,本公司将全额退还客户已付款项。