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服务简介：

腺病毒（Adenovirus，AdV）是一种非整合型双链DNA病毒，在自然界中广泛分布。尽管一些类型的腺病毒会引起人胃肠道、呼吸系统或眼部的急性感染，但是应用于基因治疗研究的腺病毒是安全的，对人无致病、致畸、致癌的潜在危害。腺病毒颗粒没有包膜的直径为70～90nm的颗粒，由252个壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7～9nm。衣壳里是线状双链DNA分子，约含35 000 bp，两端各有长约100 bp的反向重复序列。据Journal of Gene Medicine的统计，截至2006年，在全球1192项基因治疗临床试验方案中，有305项(26％)使用腺病毒载体，首次超过反转录病毒，居第一位。由于腺病毒可以感染呼吸道和消化道，所以它所介导的基因治疗不仅可以静脉注射，还可以通过口服经肠道吸收或通过喷雾、滴注经呼吸道吸收，使得基因治疗易于推广应用。腺病毒易于制备、纯化和浓缩，病毒滴度可以高达10¹¹pfu/ml，比反转录病毒高出10000倍以上。所以，它介导的基因治疗常采用in vivo的方式进行，是目前基因治疗临床试验中应用最多的一种载体。

腺病毒载体有下列优点：

（1）腺病毒的基因结构与功能研究的比较清楚；
（2）可装入基因的容量较大；
（3）转染范围广，转染率较高，所有腺病毒载体均有转染分裂期和非分裂期细胞的能力；
（4）不整合到靶细胞基因组，无插入突变，无致癌性，对人无致病、致畸、致癌的潜在危害；
（5）可以复制出滴度高（可以达到10¹¹VP/ml）、稳定性好、基因转移效率高的病毒；
（6）可以在肠道、呼吸道繁殖，具有口服活疫苗的发展前景；
（7）很容易进行临床应用规模的商业化生产，其病毒储藏及运送条件均十分清楚；

腺病毒载体的缺点主要是运输的基因不能持续表达，通常只表达5-20天，以及易引起局部组织炎症反应和机体免疫反应，针对这一缺憾，赢润生物在Adeasy、AdMax等腺病毒系统的基础上，经过不断的改进与优化，建立了一套成熟的腺病毒包装系统，已解决各类科研用户的不同需求。该系统是以复制缺陷型腺病毒DNA为骨架构建成的重组腺病毒系统，在穿梭载体、病毒骨架载体及包装细胞系等方面有很大优势，出毒快捷、滴度高、包装可靠！

腺病毒包装服务分过表达用腺病毒包装和RNA干扰用腺病毒包装。

1、过表达用腺病毒包装

服务宗旨：

给客户提供以慢病毒、腺病毒为主的应用于临床前细胞学实验和整体动物实验的针对不同基因和药物靶标的各种即用型病毒颗粒。

服务内容：

重组慢/腺病毒载体构建服务，包括插入目的基因使其过表达，或者插入shRNA片断达到目的基因RNAi的效果；同时可以根据客户的需要，可在重组慢/腺病毒载体中加入各种报告基因或标签；并可构建可调控表达的重组腺病毒载体。重组慢/腺病毒扩增及纯化，超大量及超高滴度的扩增及纯化病毒滴度高，纯化后可以达到2×10¹⁰- 1×10¹² pfu/ml（腺病毒），2×10⁸- 2×10⁹ pfu/ml（慢病毒）体积在1-2ml左右，可以满足细胞水平研究所需病毒量和满足瘤内注射需要量不同规格病毒扩增。

客户须知：

1、 腺病毒的感染依赖于细胞表面的柯萨奇-腺病毒受体(CAR)，虽然其可以感染多种宿主及大量的细胞株／系，仍有少量细胞因其表达不带该受体而无法进行有效感染，客户在确定是否采用重组腺病毒之前请先通过阅读文献或是预实验来确定实验的目标基细胞可被腺病毒感染。
2、 本公司目前不提供对致癌基因及毒基因等对人体有危害的基因的包装服务。
3、 如客户所需包装的目的基因由客户提供，则要求客户提供所要构建腺病毒的目的shRNA/基因的序列及其它相关说明信息，所在的载体的图谱及序列。
4、 如客户所需包装的目的基因由客户提供，则客户需要提供足量高纯度的质粒(>5ug，电泳图清晰，达酶切测序要求)及本公司鉴定工作所需的材料。
5、 本公司在收到客户提供的材料后会在第二个工作日起开始鉴定工作，鉴定的时间不包括在腺病毒包装制备的时间内。
6、 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

实验流程：

1、 工具细胞及HEK293细胞的培养，病毒载体的构建与质粒抽提；
2、 转染工具细胞检测沉默效率；
3、 qPCR检测和Western-blot检测（需要做预实验检测引物条件和抗体效价）；
4、 选择沉默效率最高的病毒进行包装；
5、 病毒鉴定和HEK293细胞的扩大培养；
6、 病毒扩增与纯化；
7、 滴度测定、qPCR检测和Western-blot检测;
8、 整理实验数据与进行结果分析，出实验报告。

服务承诺：

• 1、 提供20ug病毒过表达用载体质粒及对应500ul甘油菌；
• 2、 提供2*10⁸TU/ml的慢病毒颗粒或者1*10¹¹TU/ml的腺病毒颗粒；
• 3、 提供全套实验报告，包括实验流程，仪器，方法，原始数据与图片等。

服务价格与周期

2、干扰用腺病毒包装

服务宗旨：

给客户提供以慢病毒、腺病毒为主的应用于临床前细胞学实验和整体动物实验的针对不同基因和药物靶标的各种即用型病毒颗粒。

服务内容：

1、 重组慢/腺病毒载体构建服务。包括插入目的基因使其过表达，或者插入shRNA片断达到目的基因RNAi的效果；
2、 在重组慢/腺病毒载体中加入各种报告基因或标签；
3、 构建可调控表达的重组腺病毒载体；
4、 重组慢/腺病毒扩增及纯化，超大量及超高滴度的扩增及纯化病毒滴度高，纯化后可以达到2×10¹⁰- 1×10¹² pfu/ml（腺病毒），2×10⁸- 2×10⁹ pfu/ml（慢病毒）体积在1-2ml左右，可以满足细胞水平研究所需病毒量和满足瘤内注射需要量不同规格病毒扩增。

客户须知：

1、 客户提供目的基因序列（或由我们合成）、病毒RNAi载体选择信息与要求、实验设计与要求等；
2、 我们根据信息设计3-4个RNAi靶点序列或者直接选择客户提供的RNAi序列信息；完成病毒RNAi载体的构建与测序；完成病毒载体质粒的抽提并进行病毒包装;
3、 如客户所需包装的目的基因由客户提供，则要求客户提供所要构建腺病毒的目的shRNA/基因的序列及其它相关说明信息，所在的载体的图谱及序列。
4、 如客户所需包装的目的基因由客户提供，则客户需要提供足量高纯度的质粒(>5ug，电泳图清晰，达酶切测序要求)及本公司鉴定工作所需的材料。
5、 本公司在收到客户提供的材料后会在第二个工作日起开始鉴定工作，鉴定的时间不包括在腺病毒包装制备的时间内。
6、 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

实验流程：

1、 工具细胞及HEK293细胞的培养，病毒载体的构建与质粒抽提；
2、 转染工具细胞检测沉默效率；
3、 qPCR检测和Western-blot检测（需要做预实验检测引物条件和抗体效价）；
4、 选择沉默效率最高的病毒进行包装；
5、 病毒鉴定和HEK293细胞的扩大培养；
6、 病毒扩增与纯化；
7、 滴度测定、qPCR检测和Western-blot检测;
8、 整理实验数据与进行结果分析，出实验报告。

服务承诺：

• 1、 提供20ug病毒RNAi载体质粒及对应500ul甘油菌；
• 2、 提供2*10⁸TU/ml的慢病毒颗粒或者1*10¹¹TU/ml的腺病毒颗粒；
• 3、 提供全套实验报告，包括实验流程，仪器，方法，原始数据与图片等。

服务价格与周期