服务简介：
常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前 者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中、虽然可以达到高水平的表达，但通常只持续几 天。在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系 统如荧 光蛋白，β-半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源质粒DNA整合 到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基 础 上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒。建立稳定的细胞系，是对靶细胞进 行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，最常用的真 核表达 基因载体的标志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin），常用G418进行选 择性筛选。筛选得到的细胞可稳定表达目的蛋 白，可以用于蛋白的扩增和富集，或者得到稳定沉默特定基因的细胞株。
服务内容：
载体构建服务，也可以针对构建好的外源质粒DNA进行稳定筛选。针对质粒DNA的抗 性标志，选择相应的药物，并对所需筛选的细胞进行药物测试，选择细胞全部凋亡时 药物的最低浓度。瞬时转染后，在该浓度条件下进行筛选。10-14天后，挑取单克隆， 扩增后通过RT-PCR检测mRNA表达情况或客户提供靶基因特异性抗体，进行Western Blot检测，根据蛋白表达情况，进一步筛选出稳定细胞株。
服务流程图
1、客户提供构建成功的载体质粒及其它相关载体基因信息、提供细胞系或原代细胞、PCR引物或抗体；
2、我们根据客户信息进行载体构建或质粒抽提、纯化；进行瞬时转染预实验或稳转所需细胞；进行细胞培养及药物筛选；进行RT-PCR检测或Western-blot检测；
3、给客户提供构建成功的质粒及甘油菌及详细的信息；一瓶新鲜的筛选成功的稳定细胞株和相应的对照细胞株；全套实验报告 、包括实验流程仪器方法原始数据及图 片等。
实验流程:
- 1、载体构建或质粒抽提的同时进行细胞培养；
- 2、进行瞬时转染预实验及细胞浓度筛选；
- 3、进行转染筛选，挑取单克隆细胞并培养；
- 4、同时进行引物抗体浓度的条件摸索；
- 5、进行Western-blot和/或RT-PCR检测；
- 6、数据整理及结果分析。
服务价格及周期：
根据具体情况商讨。